Polimeraza DNA Phi29

Description

Rekombinowana polimeraza DNA phi29 to klasyczny enzym przeznaczony do powszechnych zastosowań w izotermicznej amplifikacji DNA, prowadzonych w umiarkowanych temperaturach w oparciu o aktywność wypierania nici (strand displacement). Enzym dostarczany jest wraz ze zoptymalizowanym buforem o wysokiej wydajności. Użytkownik powinien we własnym zakresie dodać dNTP, matrycę oraz startery. Polimeraza wykazuje silną aktywność wypierania nici oraz wydajną aktywność polimerazy 5’–3’ w zakresie temperatur około 4–35°C, umożliwiając syntezę DNA z niewielkich ilości matrycy do ogromnych wydajności, objawiających się wyraźnym wzrostem lepkości mieszaniny reakcyjnej. Enzym pozbawiony jest aktywności 5’–3’ egzonukleazy, posiada jednak silną aktywność 3’–5’ egzonukleazy (proofreading), co może prowadzić do degradacji starterów; z tego względu zaleca się stosowanie starterów chronionych na końcu 3’ (exo-resistant). Enzym może być inaktywowany termicznie, toleruje dUTP i generuje produkty o tępych końcach (blunt-ended DNA).

Zalety:

• Izotermiczna amplifikacja (High fidelity)
• Ekstremalna procesywność
• Wysoka wierność

Obszar zastosowań:

• Izotermiczna amplifikacja DNA do sekwencjonowania lub klonowania
• Amplifikacja metodą toczącego się koła (RCA)
• Amplifikacja z wielokrotnym przemieszczeniem (MDA
• Amplifikacja DNA do wykrywania SNP i STR
• Amplifikacja DNA inicjowana białkiem lub RNA
• Amplifikacja całego genomu (WGA)

Stężenie:

• 10 U/μl (5–100 U/μl na zapytanie)

Przechowywanie i bufor do rozcieńczania:

• Bufor glicerolowy: 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% Tween-20, 2 mM TCEP, 50% glycerol
• Bufor bez glicerolu: 20 mM Tris HCl (pH 7.5), 1 mM EDTA, 100 mM KCl, 750 mM trehalose, 5 mM TCEP

Warunki przechowywania i transportu:

• Od -24°C do -16°C – 1 rok
• Unikać cykli zamrażania/rozmrażania